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14.D【解析】用移液管稀释菌液时,移液管应严格灭菌,同时该过程中对移液管吹吸三次的目的是使菌液与无菌水充分混匀,以减少实验误差,A正确;涂布前要将涂布器灼烧,冷却后才能涂布菌液,这样可以避免杂菌污染,同时也防止菌种被烫死,B正确;在使用稀释涂布平板法进行计数时,需要每个稀释度下至少涂布三个平板,且选取菌落数目稳定在30~300之间的平板进行计数,C正确;用稀释涂布平板法计数的结果比实际值偏低,是因为当两个或多个菌体聚集在一起时,长成的是一个菌落,D错误。
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