生物答案)
20.（12分）学以下材料，回答（1）～（4）题。噬菌体展示技术筛选单克隆抗体表面。此技术可通过构建噬菌体抗体库，筛选出高亲和力抗体以识别特定抗原。噬菌体展示技术的第一步：需要构建含有抗体基因的噬菌体库，过程如图1所示。免疫动物后，获取B细胞，分别扩增抗体基因的重链可变区序列（VH）和轻链可变区序列（VL），通过接头序列（G4S）连接成VH-G4S-VL融合基因。这些基因序列被整合到编码噬菌体蛋白的质粒（噬菌粒）中，再导入大肠杆菌中，通常每个细菌含一个噬菌粒。大肠杆菌最终会释放出展示抗体的噬菌体。若实验室已有抗体基因文库，则无需免疫动物，构建噬菌体库的时间可缩短至两天左右。抗原B细胞提取mRNA分别O提取扩增VH和VLDM构建VH-G4S-VL融合基因MM含抗体基因序列的噬菌粒到哮释放噬菌体噬菌粒导入大肠杆菌抗体一菌体抗体库抗体基因库图1噬菌体展示技术的第二步：淘选出与目标抗原结合能力强的噬菌体，过程如图2所示。将尾部展示抗体的噬菌体加到固定化的抗原中，经过两次目的不同的洗脱后，利用得到的噬菌体侵染大肠杆菌得到子代噬菌体。这样的淘选过程需要重复3~4轮，耗时一周左右，可从容量百亿的基因文库中快速筛选阳性噬菌体，再结合其他技术手段筛选出与目标抗原结合能力最强的阳性噬菌体单克隆。获取其中的抗体基因序列，将其导入特定细胞中，大量表达出人类所需抗体。育固定化抗原T侵染大肠杆菌释放子代噬菌体图2噬菌体展示技术与传统制备单抗的技术相比，周期短，成本低，可以大规模筛选，在药物研发中应用广泛。
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