1生物答案)
限制路识别序列和切割位点IHC'CATCC自续子自动子R3bpBR4EcoRI③PCR4G'AATTC①PCRI③PCR3MfeIC'AATTGBelIT'GATCA③直叠经伸PCRI重叠延停PCR2注：spe为壮观霉索抗性基因po]和corC是锚定基因，分别在枯萃poJ-paA（2295bp）cbpB（1522bp)穿孢杆菌和芽袍中表达井锚定到表面EcoRI停列序列9876bp11377bp7602b列B序列图1（1）已知引物R1与引物F2部分序列互补配对，以便合成融合基因spoⅢIJ-spaA。其中R1的序列为5'-CCTGCCGCCACCGCCGCTTCCCCCACCGCCGCTTCCACCGCCACCCTTTTTCT-3'则PCR2过程中构建的引物F2的序列为_（2分）。D5'-GAGGAGCGAAAACCGAGAGACTTAGGGCCTACGCTATATATCG-3②5'-CGGTGGCGGAAGCGGCGGTGGCGGCAGCGATTCGAC-3③5'-GCCACCGCCTTCGCCGCCACCGCCGTCGCTAAGCTG-3?5'-TTGGCTATGTTTTACGATTAGGCAGCGATTCGAC-3（2）已知过程7、8都用双酶切构建重组质粒，则设计PCR1时在引物F1的端添加的限制酶识别序列是。质粒pDG中BamHI和EcoRI之间的长度（填“大于”“小于”或“等于”）MfeI和BclI之间的长度。过程、8不能同时在同一体系中进行的主要原因是，若同时进行，酶切后的连接产物多。注：枯草芽孢杆菌DNA上属色区段为（3）将重组质粒pDG-CBJA导人枯草芽孢杆菌，将发生如枯草芽孢杆菌DNA完整的淀粉酶基因。图2所示的同源重组过程，pDG中的序列A、序列B的设计依据是序列B序列A-amyE（4）对转化的枯草芽孢杆菌进行筛选时，应将菌种接种在pDG-CBJA（淀粉酯基四）含壮观霉素和的板上，37℃培养24h，加碘液，3min后弃去碘液，观察菌落周围有无透明圈产生，选择的菌落来制备疫苗。（5）科研人员研究了不同疫苗体液免疫应答的效果，结果ceC-cbpBpollJ-spaApe重组DNA如图3，A组为磷酸缓冲液，B组为野生型枯草芽孢杆图2菌菌体，C组为野生型枯草芽孢杆菌芽孢，D组为重组枯草芽孢杆菌菌体活载体疫苗，E组为重组枯草芽孢白抗体相对含：杆菌芽孢活载体疫苗。3OD①五组实验中，组为对照组。OE②小鼠口服菌体活载体疫苗（表达SpaA）后，血清抗CbpBSpaA抗体低；芽孢活载体疫苗不表达SpaA，但小鼠抗杭口服芽孢活载体疫苗后血清抗SpaA抗体较高，其原驾0时间/天42血时间/天因是（2分）。图3生物试卷第8页（共8页）
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