·生物-R-必考-HUN]一试题)
4.(16分)四环素是放线菌产生的一种广谱抗生素，既可以用来进行动物疾病的治疗，还可以作为饲料添加剂促进动物生长。然而，四环素的化学结构稳定，在动物体内并不能被完全吸收转化，大部分随尿液排出体外，易在环境中积累，造成污染。研究人员从养鸡场粪便堆肥中筛选获得两株对四环素具有一定降解能力的菌株，并探究其对四环素降解的最佳条件，为修复及治理被四环素污染的环境提供菌种资源和理论依据。回答下列问题(1)为筛选出四环素降解菌，从饲料中添加的养鸡场粪便中取5g样品，加入无菌水制成悬液接种至适宜的液体培养基中，置于30℃、l60t/min的摇床中恒温振荡培养，此操作的目的是(2)培养结束后对培养液进行梯度稀释，从不同稀释倍数的稀释液中各吸取100L稀释液，涂布于含有一定浓度四环素的选择培养基上。待长出单菌落，挑选菌落形态外观不同的单菌落直接用法进一步分离纯化。若要临时保藏菌种，可将其接种到试管的上，待长成菌落后再置于4℃冰箱中保藏，以备后续实验。(3)分离得到两种对四环素具有降解能力的菌种A和B。为研究加入不同碳源和氮源时，对两种菌降解四环素能力的影响，在含适宜浓度四环素的无机盐培养基中分别加入1%不同碳源和氮源作为实验组，不加碳源或氮源的作为对照组，6d后测定四环素残留量，结果如图所示。圈A菌w□B菌圈A菌□B菌404020照萄糖粉对蛋酵牛尿氯照母肉糖素化胨粉膏碳源氮源①四环素可为能降解四环素的微生物提供碳源，碳源可为微生物的生长提供(答出两点)；分析可知，在碳源和氮源分别为时，A菌降解四环素的能力最高；添加葡萄糖对B菌降解四环素具有(填“促进”或“抑制”)作用。②为保证实验的严谨性，本实验还需要再添加一组对照实验，该对照实验的设置为【答案】(1)四环素增加四环素降解菌的浓度(2)板划线固体斜面培养基(3)①能量和合成其他物质的原料蔗糖和蛋白胨促进②不添加碳源、氮源和四环素降解菌【解析】(1)四环素降解菌能分解四环素，要筛选出四环素降解菌，饲料中需要添加四环素，然后从养鸡场粪便中取5g样品，加入无菌水制成悬液接种至适宜的液体培养基中，液体培养基可以培养四环素降解菌，因此此操作的目的是增加四环素降解菌的浓度。(2)微生物常见的接种方法有板划线法和稀释涂布板法，已经通过稀释涂布板法分离出了单菌落，接下来需要挑选菌落形态外观不同的单菌落直接用板划线法进一步分离纯化。临时保藏菌种，可将其接种到试管的固体斜面培养基上，待长成菌落后再置于4℃冰箱中保藏，以备后续实验。(3)①四环素可为能降解四环素的微生物提供碳源，碳源可为微生物的生长提供能量和合成其他物质的原料。由图可知，在碳源和氨源分别为蔗糖和蛋白胨时，A菌组中的四环素残留量最少，说明A菌降解四环素的能力最高；添加葡萄糖，B菌组中的四环素残留量少于对照组，添加葡萄糖对B菌降解四环素具有促进作用。②本实验中不加碳源或氨源的组作为对照组，但实验组都加入了四环素降解菌，还缺少一组不加四环素降解菌的实验，故本实验还需添加一组不添加碳源、氨源和四环素降解菌的对照实验。5.(14分)枸杞子是应用极为广泛的一种中药饮片，李时珍在《本草纲目》中把枸杞子的主要功效归纳为“滋肾、润肺、明目”，又曰“久服，坚筋骨，轻身不老，耐寒暑”。我国对中药饮片中的微生物含量有明确规定。为调查某家药店在售枸杞子的耐热菌污染情况，研究人员进行如下实验。步骤一：取枸杞子样品25g,加入pH为7.0的氯化钠蛋白胨缓冲液225mL,用无菌纱布过滤制备成待测液。步骤二：步骤三：取10mL待测液，接种至100mL胰酪大豆胨液体培养基中培养步骤四：以10倍梯度依次稀释4次，取1mL涂布接种于胰酪大豆胨板上，培养72h。步骤五：观察并进行计数。回答问题：·99·
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